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細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)的工作流程

更新時(shí)間:2023-08-24   點(diǎn)擊次數(shù):1126次

細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)的工作流程

ibidi


圖片

ibidi Chemotaxis 2D and 3D細(xì)胞趨化載玻片


可視2D/3D細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)流程:

圖片

開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前

必要設(shè)備

基本要求:

倒置相差顯微鏡(推薦5倍或10倍物鏡)

用于延時(shí)圖像采集的相機(jī)

Stage Top培養(yǎng)箱(大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞類(lèi)型需要)


推薦擴(kuò)展:

用于并行圖像采集的電動(dòng)載物臺(tái)

自動(dòng)對(duì)焦



1.樣品制備

步驟

使用ibidi µ-Slide Chemotaxis細(xì)胞趨化載玻片,可以進(jìn)行具有定義的趨化梯度的可重現(xiàn)的趨化性測(cè)定。


首先,細(xì)胞接種,這可以在2D或3D環(huán)境中完成。孵育和細(xì)胞附著后,根據(jù)確定的加載方案,用趨化劑填充滿(mǎn)每個(gè)腔室的兩個(gè)儲(chǔ)液池。

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ibidi 的解決方案

圖片

µ-Slide Chemotaxis 包含3個(gè)獨(dú)立的腔室,用于使用緩慢或快速遷移的細(xì)胞進(jìn)行平行趨化性測(cè)定。


它允許在可重現(xiàn)的環(huán)境中創(chuàng)建精確定義的、穩(wěn)定的趨化梯度。



2.活細(xì)胞成像

步驟

生理?xiàng)l件下的活細(xì)胞成像能夠詳細(xì)記錄細(xì)胞隨時(shí)間的遷移,這是正確分析趨化性測(cè)定所必需的過(guò)程。


成像周期的持續(xù)時(shí)間取決于細(xì)胞類(lèi)型(例如,快速遷移的白細(xì)胞或緩慢遷移的腫瘤細(xì)胞或成纖維細(xì)胞)和環(huán)境條件(例如,趨化劑的類(lèi)型和濃度)。用于緩慢遷移細(xì)胞的典型視頻顯微鏡設(shè)置包括在24小時(shí)內(nèi)每 2.5-10分鐘拍攝一張照片。


由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)最佳地包含來(lái)自20-40個(gè)單細(xì)胞的跟蹤數(shù)據(jù),因此應(yīng)使用低倍顯微鏡物鏡,例如4倍或10倍。

圖片

MDA-MB-231 人乳腺癌細(xì)胞在膠原凝膠中遷移的延時(shí)顯微成像。在 µ-Slide Chemotaxis 中以 EGF 作為趨化劑觀察細(xì)胞 24小時(shí)。生理?xiàng)l件由ibidi加熱和氣體培養(yǎng)系統(tǒng)維持。


ibidi的解決方案

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ibidi Stage Top Incubators ibidi加熱和氣體培養(yǎng)系統(tǒng)提供顯微鏡下的生理環(huán)境,可在短期和長(zhǎng)期趨化性測(cè)定期間實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞成像。




3.細(xì)胞追蹤

步驟

通常趨化性測(cè)定的活細(xì)胞顯微鏡檢查會(huì)創(chuàng)建時(shí)間圖像堆棧,其中每個(gè)圖像顯示特定時(shí)間點(diǎn)的確切細(xì)胞位置。


為了量化它們的運(yùn)動(dòng),通過(guò)確定它們?cè)趫D像堆棧的每一幀上的位置來(lái)跟蹤單個(gè)細(xì)胞。跟蹤可以手動(dòng)完成,也可以使用特殊軟件自動(dòng)完成。之后,每個(gè)跟蹤單元格 (x, y)的位置值可用于每個(gè)時(shí)間點(diǎn)(t)并可以進(jìn)一步分析。

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使用ImageJ手動(dòng)跟蹤插件跟蹤后的細(xì)胞跟蹤可視化。


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跟蹤后ImageJ手動(dòng)跟蹤插件的輸出;具有每個(gè)時(shí)間點(diǎn)(t)的每個(gè)被跟蹤單元(x,y)的位置值的數(shù)據(jù)表。


ibidi的解決方案

自動(dòng)跟蹤和數(shù)據(jù)分析:

MetaVi Labs的Chemotaxis FastTrack AI Image Analysis圖像分析是一種基于AI的自動(dòng)圖像分析解決方案,用于趨化性測(cè)定。基于網(wǎng)絡(luò)的軟件將快速而強(qiáng)大的細(xì)胞跟蹤與人工智能 (AI) 相結(jié)合,無(wú)需標(biāo)記即可進(jìn)行客觀且可重復(fù)的分析。只需將您的數(shù)據(jù)上傳到您的FastTrack AI帳戶(hù),即可開(kāi)始分析工作。在1到2小時(shí)內(nèi),您將收到一份詳細(xì)的報(bào)告供下載和進(jìn)一步評(píng)估。

圖片

手動(dòng)跟蹤:

ImageJ手動(dòng)跟蹤插件有助于在趨化性測(cè)定中手動(dòng)跟蹤細(xì)胞遷移。

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4.數(shù)據(jù)分析
圖片

趨化性測(cè)定數(shù)據(jù)分析步驟:

數(shù)據(jù)繪圖

定量與統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)解釋


訂購(gòu)信息:

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